Dữ liệu kỹ thuật
Hướng dẫn sử dụng cột/tấm để khử muối c18
Giới thiệu sản phẩm
Các cột/tấm khử muối C18 được lấp đầy bằng ma trận silica gel C18, nhóm chức năng octadecyl của nó có tính kỵ nước cao và đặc tính giữ lại tuyệt vời đối với các hợp chất không phân cực. Các cột/tấm khử muối C18 có thể hấp thụ các phân tử primer/oligo/DNA bằng DMT mà không giữ lại muối, tạo ra các sản phẩm primer/oligo/DNA có độ tinh khiết cao.
Hướng dẫn lựa chọn
BM Life Sciences cung cấp các cột/tấm khử muối C18 với nhiều kích cỡ khác nhau và bạn có thể chọn cột khử muối phù hợp dựa trên nồng độ mồi/oligo. Đối với quá trình xử lý theo mẻ, bạn có thể chọn tấm khử muối 96 giếng.
| Số sản phẩm | chuẩn mực | Thông số kỹ thuật oligonucleotide áp dụng | Các bước tham khảo |
| ĐẶC ĐIỂM 18W150 | 50mg/1mL | 10nmol - 200nmol | Bước 5 |
| ĐẶC ĐIỂM KỸ THUẬT 18W3100 | 100mg/3mL | 10nmol - 600nmol | Bước 1 |
| ĐẶC ĐIỂM KỸ THUẬT 18W3300 | 300mg/3mL | 10nmol - 2 .opmol | Bước 2 |
| ĐẶC ĐIỂM KỸ THUẬT 18W61000 | 1g/6mL | 1 µmol - 6 µmol | Bước 3 |
| ĐẶC ĐIỂM 18W9630 | Tấm 30mg/96 giếng | 5nmol - 100nmol | Bước 4 |
| ĐẶC ĐIỂM KỸ THUẬT 18W9650 | Tấm 50mg/96 giếng | 10nmol - 200nmol | Bước 4 |
| SPE15C18W9680 | Đĩa 80mg/96 giếng (đĩa 96 giếng 1,5ml) | 10nmol - 500nmol | Bước 5 |
| SPE23C18W9680 | Đĩa 80mg/96 giếng (đĩa 96 giếng 2,3ml) | 10nmol - 500nmol | Bước 5 |
Ghi chú
Cột/Tấm làm sạch C18 cũng có thể khử muối sản phẩm thô và mồi/oligo sau khi tinh chế bằng HPLC và PAGE, xem bước 5 để biết chi tiết.
Thuốc thử
Cấp sắc ký Acetonitrile
0,1 M TRÀ, PH7.0
0,5M NaCl
Dung dịch rửa (acetonitril 5% hòa tan trong NaCl 0,5 M)
Axit trifluoroacetic 3% (TFA)
Nước khử ion
20% acetonitril
Đệm TE: 10 mmol/L Tris-cla, 1 mmol/L EDTA, PH 8.0
Bước 1
Chuẩn bị mẫu
Thêm 0,5 M NacI vào mẫu oligonucleotide đến thể tích 2 mL.
Kích hoạt cột khử muối
Hoạt hóa: Sử dụng 1 mL acetonitril để hoạt hóa cột.
Cân bằng: Cân cột bằng 1 mL dung dịch TEAA 0,1 M (PH7,0).
Quá trình vệ sinh
1. Cho 2 mL dung dịch chứa oligonucleotide đi qua cột khử muối.
2. Rửa cột 2 lần bằng 1 mL dung dịch rửa để loại bỏ các chuỗi không thành công.
3. Rửa cột 2 lần bằng 1 ml nước khử ion để loại bỏ muối.
4. Rửa cột 2 lần bằng 1 ml axit trifluoroacetic 3% để loại bỏ DMT và quan sát thấy lớp hấp phụ chuyển sang màu đỏ cam; và
5. Rửa cột khử muối hai lần bằng 1 mL nước khử ion để loại bỏ axit trifluoroacetic và muối còn sót lại.
6. Tách 1ml acetonitril 20% và lắp ráp.
Bước 2
Chuẩn bị mẫu
Thêm 0,5 M NacI vào mẫu oligonucleotide đến thể tích 4 mL.
Kích hoạt cột khử muối
Hoạt hóa: Sử dụng 2 mL acetonitril để hoạt hóa cột.
Cân bằng: Cân bằng cột 2 mL với TEAA 0,1 M (PH 7,0).
Quá trình vệ sinh
1. Cho 4 mL dung dịch chứa oligonucleotide đi qua cột khử muối.
2. Rửa cột 2 lần bằng 2 ml dung dịch rửa để loại bỏ các chuỗi không thành công.
3. Rửa cột 2 lần bằng 2 ml nước khử ion để loại bỏ muối ;)
4. Rửa cột 2 lần bằng 2ml axit trifluoroacetic 3% để loại bỏ DMT, lớp hấp phụ chuyển sang màu đỏ cam.
5. Rửa cột bằng nước khử khoáng hai lần với 2 mL nước khử ion để loại bỏ axit trifluoroacetic và các muối còn lại.
6. Rửa giải 2ml acetonitril 20% và lắp ráp.
Bước 3
Chuẩn bị mẫu
Thêm 0,5 M Nac vào mẫu oligonucleotide đến thể tích 10 mL.
Kích hoạt cột khử muối
Hoạt hóa: Sử dụng 5 mL acetonitril để hoạt hóa cột.
Cân bằng: Cột được cân bằng với 10 mL TEAA 0,1 m (PH 7,0).
Quá trình vệ sinh
1. 10 mL dung dịch chứa oligonucleotide được dẫn qua cột khử muối.
2. Cột được rửa hai lần bằng 5 mL dung dịch rửa để loại bỏ các chuỗi không thành công.
3. Rửa cột hai lần bằng 5 mL nước khử ion để loại bỏ muối.
4. Rửa cột hai lần bằng 5 mL axit trifluoroacetic 3% để loại bỏ DMT và nhận thấy lớp hấp phụ đã chuyển sang màu đỏ cam.
5. Rửa cột hai lần bằng 5ml nước khử ion để loại bỏ axit trifluoroacetic và cặn muối.
6. Rửa giải 5 ml acetonitril 20% và thu thập.
Bước 4
Chuẩn bị mẫu
Thêm 0,5 M NaCl vào mẫu oligonucleotide đến thể tích 0,5 mL.
Kích hoạt tấm 96 giếng
Hoạt hóa: 0,5 mL acetonitril được truyền qua mỗi giếng của đĩa 96 giếng.
Cân bằng: Cân bằng đĩa 96 giếng với 0,5 mL dung dịch TEAA 0,1 M (pH 7,0).
Quy trình vệ sinh
1. Cho 0,5 mL dung dịch chứa oligonucleotide qua đĩa 96 giếng.
2. Rửa đĩa 96 giếng 2 lần bằng 0,5 mL dung dịch rửa để loại bỏ các trình tự xấu.
3. Rửa đĩa 96 giếng 2 lần bằng 0,5 mL nước khử ion để loại bỏ muối.
4. Rửa đĩa 96 giếng 2 lần bằng 0,5 ml axit trifluoroacetic 3% để loại bỏ DMT và quan sát thấy lớp hấp phụ chuyển sang màu đỏ cam; và
5. Rửa đĩa 96 giếng hai lần bằng 0,5 mL nước khử ion để loại bỏ axit trifluoroacetic và cặn muối.
6. Rửa giải 0,5 ml acetonitril 20% và thu thập vật liệu.
Bước 5
Chuẩn bị mẫu
Thêm 0,5 M NaCl vào mẫu oligonucleotide đến thể tích 1,2/2 mL.
Kích hoạt tấm 96 giếng
Kích hoạt: Bỏ qua 1-4 ml 0,5 mL acetonitril qua mỗi giếng của đĩa 96 giếng.
Cân bằng: Cân bằng một đĩa 96 giếng với 1-4 mL 0,5 mL dung dịch TEAA 0,1 M (PH 7,0).
Quá trình vệ sinh
1. Cho 0,5-2 mL dung dịch chứa oligonucleotide qua đĩa 96 giếng.
2. Rửa đĩa 96 giếng 2 lần bằng 1/2 mL dung dịch rửa để loại bỏ các trình tự không mong muốn ;)
3. Rửa đĩa 96 giếng hai lần bằng 1/2 mL nước khử ion để loại bỏ muối.
4. Rửa đĩa 96 giếng 2 lần bằng 1/2ml axit trifluoroacetic 3% để loại bỏ DMT, và quan sát thấy lớp hấp phụ chuyển sang màu đỏ cam;
5. Rửa đĩa 96 giếng bằng 1/2 mL nước khử ion 2 lần để loại bỏ axit trifluoroacetic và cặn muối.
6. Rửa giải 1/2ml acetonitril 20% và thu thập vật liệu.
Bước 6
Thuốc thử
Cấp sắc ký Acetonitrile
0,05 M TRÀ, PH 7,0
2 M TRÀ, PH 7.0
Nước khử ion (để khử muối và tinh chế các phân tử RNA mà không cần RNase) 60% acetonitrile (hòa tan trong nước chứa 0,5% NH4OH)
20% acetonitrile (để khử muối các phân tử DNA hoặc RNA sau khi khử bảo vệ)
Đệm TE: 10 mmol/L Tris-cla, 1 mmol/L EDTA, PH 8.0
Chuẩn bị mẫu
Oligo tinh khiết bằng HPLC: Thêm một lượng TEAA 0,1 M thích hợp vào oligo tinh khiết bằng HPLC sao cho nồng độ acetonitril cuối cùng ≤5%. Oligo tinh khiết: Hòa tan các mảnh gel chứa oligonucleotide trong TEAA 0,05 M, loại bỏ các mảnh gel, hòa tan oligo trong ít nhất 2 mL TEAA 0,1 M.
Oligo hòa tan trong NH4OH hoặc AMA: Làm bay hơi cho đến khi khô và hòa tan trong 2 mL TEAA 0,1 M.
Kích hoạt máy bơm khử muối
Hoạt hóa: Sử dụng 1 mL acetonitril để hoạt hóa cột.
Cân bằng: Cân cột TEAA 1 mL 2 M (pH 7,0).
Quy trình khử muối Oligo để tinh chế HPLC
1. Cho dung dịch chứa oligonucleotide đi qua cột khử muối.
2. Rửa sạch cột khử muối hai lần bằng 1 mL nước khử ion để loại bỏ muối.
3. Rửa qua cột 1 ml acetonitril 60% và thu thập.
Quy trình khử muối Oligos được tinh chế bằng phương pháp PAAG
1. Cho dung dịch chứa oligonucleotide đi qua cột khử muối.
2. Rửa sạch cột khử muối hai lần bằng 1 mL nước khử ion để loại bỏ muối.
3. Rửa qua cột 1 ml acetonitril 60% và thu thập.
Quy trình khử muối oligon DNA sau khi tổng hợp
1. Cho dung dịch chứa oligonucleotide đi qua cột khử muối; và
2. Rửa cột TEAA 1 mL 0,1M hai lần để loại bỏ các trình tự không thành công.
3. Rửa sạch cột khử muối hai lần bằng 1ml nước khử ion để loại bỏ muối.
4. Cho cột đi qua 1 ml acetonitril 20% và lắp ráp.
Quy trình khử muối RNA oligos sau khi tổng hợp
1. Cho dung dịch chứa oligonucleotide đi qua cột khử muối.
2. Rửa cột bằng 2 ml TEAA 0,1 M.
3. Rửa cột bằng 2 mL nước không chứa RNase.
4. Cho 2ml acetonitril 20% (nước không chứa RNase) đi qua cột, rửa giải và thu thập. Lưu trữ Oligonucleotide
Oligonucleotide hòa tan trong 20% acetonitril và bảo quản ở nhiệt độ 4°C có tác dụng ngăn chặn sự phát triển của vi sinh vật và thích hợp để bảo quản trong thời gian ngắn.
Oligonucleotide trong dung dịch acetonitril 20% (hoặc hòa tan trong đệm kiềm như TE) có thể được bảo quản trong thời gian dài ở nhiệt độ thấp tới -20 °C.
Oligonucleotide dưới dạng bột đông khô có thể bảo quản được trong thời gian dài.
Cảnh báo
Lượng thuốc thử sử dụng chỉ mang tính chất khuyến nghị và cần được tối ưu hóa trong từng trường hợp cụ thể.
Lượng thuốc thử sử dụng chỉ mang tính khuyến nghị và nên được tối ưu hóa theo từng trường hợp cụ thể.
Cột khử muối phải trải qua trạng thái cân bằng hoạt hóa đủ để rửa trôi các chất cặn trên cột/tấm và cải thiện khả năng liên kết của cột/tấm khử muối. Việc lấy mẫu oligonucleotide tổng hợp phải được thực hiện chậm để ngăn bột CPG xâm nhập vào cột/tấm để làm sạch và nhiễm chéo.
Các cột/tấm khử muối C18 sử dụng ma trận silica, phạm vi PH áp dụng là 2-7, PH > 7,5 dễ hòa tan ma trận silica, PH
Khi sử dụng TFA để khử muối DMT cần chú ý thời gian, quá lâu sẽ có tác dụng loại bỏ purin.
Hãy gắn bó
Cột tổng hợp B&M Universal CPG Frits Công nghệ khử muối và tinh chế nhanh
Công nghệ khử muối và làm sạch nhanh chóng của cột tổng hợp B&M Universal CPG Frits:
B&M Universal CPG Frits được làm từ polyethylene siêu tinh khiết có trọng lượng phân tử cực cao nhập khẩu và bột CPG nhập khẩu, được xử lý bằng công nghệ đặc biệt, có hiệu quả tổng hợp tốt trong cột tổng hợp, tỷ lệ đột biến thấp và chất lượng sản phẩm đáng tin cậy.
Sau khi quá trình tổng hợp hoàn tất trong máy tổng hợp Dr.Oligo/Mermade và amoniac được hòa tan, Oligo có thể được rửa giải trực tiếp vào cột tổng hợp và sau khi định lượng và xả, có thể sử dụng trực tiếp cho phản ứng PCR thông thường mà không cần các bước tinh chế bổ sung, rất tiện lợi khi vận hành, tiết kiệm chi phí và giao hàng nhanh hơn!
Các bước cụ thể của hoạt động này như sau:
1, Tổng hợp B&M Universal CPG Frits cột/tấm/giây 400ul, hỗn hợp nước siêu tinh khiết acetonitril 75% rửa hai lần để loại bỏ thuốc thử tổng hợp còn sót lại;
2, Cột/Tấm phân hủy amoniac tổng hợp B&M Universal CPG Frits, 90°C, 80PSI, Phân hủy amoniac 2-2,5 giờ;
3, cột/tấm tổng hợp rửa 100% acetonitril 400L, hai lần;
4、90% Acetonitril pha nước siêu tinh khiết 400ul cột/tấm tổng hợp rửa, hai lần, bơm khô;
5、Thể tích dung môi thích hợp để rửa giải các đoạn mồi trên cột/tấm tổng hợp, dung môi có thể là nước siêu tinh khiết, có thể là hỗn hợp nước siêu tinh khiết triethylamine 3%, cũng có thể là hỗn hợp nước siêu tinh khiết acetonitril khoảng 20%.
6、 Dung dịch rửa giải có thể được đo, phân phối, xả, đóng gói và vận chuyển.